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植物组织类样本DNA提取完整解决方案

更新日(ri)期(qi):2019年11月28日(ri) 大字 小字



植物DNA的提取和纯化(hua)是植物基(ji)(ji)因工程研究的基(ji)(ji)础(chu)操作。实施分子标记(ji)、基(ji)(ji)因图谱、基(ji)(ji)因指纹图谱、基(ji)(ji)因文库(ku)构建(jian)、遗传多态(tai)(tai)性分析、DNA重组、RAPD(随机(ji)引(yin)物多态(tai)(tai)性DNA)、RFLP(限制性酶多态(tai)(tai)性)、基(ji)(ji)因分离及遗传转化(hua)和鉴定等(deng)都以提取DNA为前提。



目(mu)前,对从(cong)植物组(zu)织中提(ti)取(qu)DNA方法的(de)(de)(de)要求是(shi):简便、有(you)效、快捷以及经济(ji)。与动物组(zu)织相比,植物组(zu)织含有(you)较多的(de)(de)(de)多糖(tang)和其他次(ci)生代谢产物(酚(fen)、酯、萜(tie)、色(se)素等),这给高(gao)质量(liang)的(de)(de)(de)DNA提(ti)取(qu)带来(lai)较多的(de)(de)(de)困难。尤其是(shi)多糖(tang)成(cheng)分是(shi)影(ying)响(xiang)DNA纯度最常见的(de)(de)(de)问题(ti)。如何(he)做到既去除这些污染(ran)物又能相对保持高(gao)的(de)(de)(de)产量(liang),并且能简捷有(you)效地提(ti)纯,一直是(shi)植物生物技(ji)术研究者探(tan)索的(de)(de)(de)问题(ti)。


01

普通的(de)植物(wu)

对于普通(tong)的植(zhi)物(wu)(低(di)(di)(di)酚、低(di)(di)(di)酯(zhi)、低(di)(di)(di)糖(tang)等)如:水(shui)稻、白(bai)菜、苋菜、南瓜(gua)、黄瓜(gua)、西红柿、上(shang)海青(qing)、菠菜、笋瓜(gua)、冬(dong)瓜(gua)、莲藕、山药、竹笋等;我们(men)可(ke)以选用(yong)普通(tong)植(zhi)物(wu)DNA提取(qu)试(shi)剂(ji)盒(磁珠法)试(shi)剂(ji)(货号:K318)。


02

多糖、多酚类植物

对于多糖(tang)、多酚类(lei)植(zhi)物(wu)(香蕉、西瓜、苹(ping)果、梨等(deng)果肉,红(hong)(hong)薯、马铃(ling)薯等(deng)块茎,棉花、月季(ji)、枇杷、益(yi)母草、夏(xia)枯草等(deng)人参、曼陀罗(luo)、向天果、射干(gan)、桔(jie)梗(geng)、满(man)山红(hong)(hong)、金(jin)鸡纳霜(shuang)等(deng)药用植(zhi)物(wu))可以选用多酚植(zhi)物(wu)DNA提取试剂盒(he)(磁珠(zhu)法)试剂(货(huo)号K319),针对类(lei)似(si)的植(zhi)物(wu)我们经过(guo)长(zhang)期的优化,可以得到较好的实验结果。


以叶片(pian)为例(li),叶片(pian)需(xu)先剪碎成小块,以便放(fang)入1.5ml离心管(guan)。最佳样本的长度(du)应(ying)在1cm 以下。重量(liang)不超过250mg,推荐使(shi)用(yong)50mg,如果是植物种子(zi)粉(fen)末(mo)可以使(shi)用(yong)10mg-20mg粉(fen)末(mo)即可。


叶子


样(yang)本(ben)数量较少(shao)的情况(kuang)下:可以使(shi)用手(shou)持式(宝予德)研磨(mo)(mo)仪(yi),将(jiang)植(zhi)物的组织切碎(sui)后(hou)放入1.5ml 尖底离心管中,将(jiang)研磨(mo)(mo)棒的头(tou)部碾压植(zhi)物组织,打开(kai)研磨(mo)(mo)仪(yi)的开(kai)关,直至肉眼看到植(zhi)物组织研磨(mo)(mo)成碎(sui)末。




样(yang)本(ben)数(shu)量较(jiao)多(duo)的(de)情况下(xia):可以使用HF Extract组织研磨(mo)仪 可以同时处理2-192个样(yang)品(需配(pei)不同适配(pei)器)。将植物的(de)组织切碎后放入2ml的(de)研磨(mo)管中,加入钢珠(zhu)(zhu)或二氧化锆珠(zhu)(zhu)8-16颗(ke)(根据试剂情况灵活选(xuan)择),按照如下(xia)方案(an)编辑研磨(mo)程序:




对于(yu)茎部纤(xian)维化比较严重的(de)组织(zhi)或者根部样(yang)本,要配合液氮处(chu)理(将植物(wu)(wu)组织(zhi)用剪刀剪切<0.5cm,放入研(yan)(yan)磨(mo)(mo)管中),使用配套(tao)的(de)冷冻(dong)(dong)研(yan)(yan)磨(mo)(mo)套(tao)件(如下图),将研(yan)(yan)磨(mo)(mo)罐中灌入液氮冷冻(dong)(dong)植物(wu)(wu)样(yang)品(pin),等液氮挥(hui)发后(hou),快(kuai)速拧(ning)好研(yan)(yan)磨(mo)(mo)罐放入研(yan)(yan)磨(mo)(mo)仪。执(zhi)行(xing)程序:




提取过程:
1

打开研磨(mo)后的管子(zi)(预(yu)先6000rpm离心30sec防止管子(zi)上(shang)的碎(sui)片或碎(sui)末飞出,污染实验室),加入裂解液APL(需要预(yu)热)400-600 μl,放入水(shui)浴锅中孵育30 min-1 h。


2

孵(fu)育后(hou),12000 rpm 离(li)心3min,取(qu)上(shang)清(qing)100μl-200μl 上(shang)清(qing)(含淀粉多的样品容易(yi)糊(hu)化,可以增加离(li)心时(shi)间至5-10min)


96孔预(yu)分装板


3

加入预分装96孔(kong)板中(zhong)的第1、7列(lie),然后(hou)放入核酸(suan)提(ti)取仪中(zhong)(如下图(tu)),插好磁棒套。点击运(yun)行程序。



4

20min后,完成DNA的提取。转(zhuan)移(yi)5、11列(lie)中(zhong)的DNA 至(zhi)1.5ml离心管(guan)中(zhong),使用(yong)超(chao)微量分光度(du)计(Mcro-Drop )检测核酸浓度(du):



5

记(ji)录检(jian)测结果,进入下步扩增(zeng)或(huo)将DNA保存至-20℃。




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